EDTA 脫鈣液

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 

    在組織切片過程中， 一些組織內(nèi)含有骨質(zhì)或鈣化灶時(shí)， 含鈣的組織不宜直接用石蠟包埋切片。 這是因?yàn)殁}和石蠟之間的密度不同， 較難切出完整的切片。 對(duì)含鈣組織最好固定之后，再進(jìn)行脫鈣或二者同時(shí)進(jìn)行。然后進(jìn)行下游操作如脫水、透明、浸蠟、包埋、切片。用于脫鈣的試劑很多，脫鈣劑包括有機(jī)酸、無(wú)機(jī)酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及電解法脫鈣。EDTA是一種相對(duì)較好的螯合脫鈣劑，對(duì)組織結(jié)構(gòu)影響最小， 可以較好的保存組織的某些酶類， 經(jīng)EDTA 脫鈣后的組織可以進(jìn)行免疫組化和原位雜交染色。但是該法脫鈣速度太慢，一般脫需要數(shù)周至數(shù)月。

     EDTA 脫鈣液主要由 EDTA、磷酸鹽等組成， pH 值為 7.2。其優(yōu)點(diǎn)是：①經(jīng)EDTA 脫鈣的組織染色結(jié)果好；②對(duì)組織的結(jié)構(gòu)損害小。其缺點(diǎn)是：①脫鈣速度很慢，不適合常規(guī)標(biāo)本脫鈣使用；②脫鈣后組織會(huì)稍微變硬；③不宜用化學(xué)方法確定脫鈣終點(diǎn)。

產(chǎn)品組成：

自備材料： 

1、 PBS

2、 蒸餾水

3、 加熱裝置或微波爐

操作步驟(僅供參考)：

1、 骨組織脫鈣時(shí)，取材不易過厚，一般大約 5mm。

2、 組織固定后，用 PBS 清洗 3 次，每次 20min。

3、 組織用蒸餾水洗清洗 3 次，每次 20min。

4、 組織轉(zhuǎn)移至 20~30 倍體積的 EDTA 脫鈣液中，脫鈣 10～30 天或更長(zhǎng)時(shí)間。如果想加快脫鈣速度，可以置于 37℃進(jìn)行脫鈣。如果必要，更換新的 EDTA 脫鈣液繼續(xù)脫鈣，

多數(shù)組織脫鈣 2 周～3 個(gè)月即可，每周更換一次直至終點(diǎn)。亦可采用微波快速脫鈣法：

微波爐設(shè)在 200W 左右的檔位，每次加熱 5min，依據(jù)組織厚度和密度重復(fù) 3～5min，                

    中間間隔 3～5min。

5、 用蒸餾水沖洗數(shù)次。

6、 常規(guī)脫水、包埋。

注意事項(xiàng)： 

1、 厚度 5mm 的骨組織塊脫鈣時(shí)間一般脫鈣 10~30 天即可，大多數(shù)在 14～60 天即可。

2、 適當(dāng)加溫能加快脫鈣的速度，一般不應(yīng)超過 37～40℃，溫度過高容易使骨組織造成松

散解體，尤其不可大于 60℃。

3、 脫鈣應(yīng)徹底， 防止脫鈣不足或過度。 脫鈣程度應(yīng)控制在不影響組織切片的同時(shí)盡量縮短脫鈣時(shí)間，以免脫鈣過長(zhǎng)引起組織損害。

4、 脫鈣用具避免使用金屬容器，盡量使用玻璃容器。

5、 骨組織脫鈣應(yīng)先固定后脫鈣或脫鈣固定同時(shí)進(jìn)行， 不應(yīng)先脫鈣后固定， 以便減少組織的損傷程度。

6、 每隔一段時(shí)間檢測(cè)一次脫鈣程度，脫鈣過度會(huì)增加組織的損傷程度，影響染色結(jié)果。

7、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 個(gè)月有效。

附錄：

脫鈣終點(diǎn)的測(cè)定(物理法)：采用針刺、手掐、鉗夾等方法，當(dāng)骨組織變軟或針刺時(shí)沒有阻力

感即可終止脫鈣。 物理檢測(cè)法會(huì)對(duì)組織結(jié)構(gòu)有一定的損害， 盡量避免用力過大或反復(fù)檢測(cè)。