名稱：四環(huán)素快速檢測試劑盒
供應(yīng)商：古朵生物
產(chǎn)地：國產(chǎn)|進口
檢測樣本：組織/血清/蜂蜜/牛奶/雞蛋/飼料/尿液
檢測方法： 酶聯(lián)免疫法
檢測限： 0.1ppb/0.05ppb
產(chǎn)品規(guī)格：96T×1/盒
保質(zhì)期：12個月
儲藏：于2～8℃避光保存。

四環(huán)素快速檢測試劑盒實驗步驟  產(chǎn)品概要：

1 原理及用途
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織、蜂蜜、雞蛋等樣本中的四環(huán)素類藥物（Tetracyclines，Tc），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的四環(huán)素類藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗四環(huán)素類藥物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含四環(huán)素類藥物含量成負相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中四環(huán)素類藥物的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度：0.05ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式：37℃，30min～30min～15min。

3 試劑盒組成
酶標(biāo)板96孔
標(biāo)準(zhǔn)品（黑蓋）：各1ml
0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb
高標(biāo)準(zhǔn)品（黑蓋）：1ppm1ml
酶標(biāo)記物 (紅蓋)12ml
抗體工作液 (藍蓋)7ml
底物液A(白蓋)7ml
底物液B(黑蓋)7ml
終止液(黃蓋)7ml
20X濃縮洗滌液(透明蓋)40 ml
5X復(fù)溶液(黃蓋)50 ml
說明書 1份

4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機、均質(zhì)器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g）
4.2 微量移液器：單道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道300μl
4.3 試劑：三氯yi酸、甲醇

5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
    實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必須使用潔凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
5.2 配液：
配液1：復(fù)溶液
    用去離子水將5×濃縮復(fù)溶液按1：4稀釋（1份濃縮復(fù)溶液+4份去離子水）用于樣本復(fù)溶。
配液2：1%三氯yi酸溶液
    稱取1g三氯yi酸加去離子水100ml溶解。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 組織、肝臟、雞蛋樣本處理方法（不用過柱）
1）用均質(zhì)器均質(zhì)組織、肝臟、雞蛋樣本；
2）稱取2±0.05g樣本于50ml離心管中，加入6ml 1%三氯yi酸溶液，振蕩2min，室溫4000r/min以上，離心10min；
3）取出1ml上清液于另一試管中，加入1m甲醇，振蕩1min，室溫4000r/min以上，離心10min；
4）取1ml上清液在50-60℃氮氣或空氣吹干，加入1ml復(fù)溶液溶解殘留的干燥物；
5）取50 μl用于分析。  樣本稀釋倍數(shù)：6
5.3.2 蜂蜜樣本處理方法
1）準(zhǔn)確稱取1±0.05g蜂蜜樣本于離心管中，加入2ml 1%三氯yi酸，振蕩2min，室溫4000r/min以上，離心10min；
2）取出100ul上清液于另一試管中，加入1900ul復(fù)溶液稀釋，混合30s；
3）取50μl用于分析。  樣本稀釋倍數(shù)：40

6 酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
實驗開始前需：
將20×濃縮洗滌液用去離子水按1:19稀釋成工作洗滌液。
制備四環(huán)素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液：將各濃度標(biāo)準(zhǔn)品分別用稀釋好的復(fù)溶液10倍稀釋成應(yīng)用液，現(xiàn)配 現(xiàn)用。（如：分別取50ul各濃度標(biāo)準(zhǔn)品加450ul稀釋好的復(fù)溶液，混合均勻，即成各濃度標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)用液。）
6.1 編    號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50μl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，37℃反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 加酶反應(yīng)：每孔加入酶標(biāo)記物100μl，蓋板膜蓋板后置37℃
環(huán)境中反應(yīng)30min。
6.5 洗    滌：同7.3
6.6 顯    色：每孔加入底物液A 50μl，再加底物液B 50μl，輕輕振蕩5秒混勻，37℃避光顯色15分鐘。
6.7 終    止：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6.8 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)終止反應(yīng)后在10分鐘內(nèi)完成。

7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計算
    標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第1個標(biāo)準(zhǔn)（0ppb）的吸光度值，再乘
以，即
 百分吸光度值（%）＝    A    ×
    A0    
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)品的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

注意事項：
實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得jia實驗效果。
標(biāo)準(zhǔn)品中含有赭曲du素A，請小心使用。
不要使用過期的試劑盒。
不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。
盡量保持室溫（22.5±2.5）°C，避免在通風(fēng)口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發(fā)。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應(yīng)該鋪墊若干紙巾或者其他物料。
水質(zhì)量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。
加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。
孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標(biāo)準(zhǔn)品的一致性，先添加標(biāo)準(zhǔn)品后添加樣品。
從低濃度到高濃度地添加標(biāo)準(zhǔn)品，降低影響標(biāo)準(zhǔn)品曲線質(zhì)量的風(fēng)險。
將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。
確保洗板正確，洗板充分。
樣品的準(zhǔn)備
確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內(nèi)解凍。

試劑的準(zhǔn)備：
所有的試劑在使用之前應(yīng)將其回溫至室溫，并在使用試劑前搖動幾下，以保證合理的濃度。
（1）1×工作洗液按1：19的比例配制濃縮洗液和蒸餾水。舉例：取10ml的20X濃縮洗液加入到190ml雙蒸餾水中，配制成200ml的1X工作洗液，按需要，可同比例放大或縮小。
（2）70%甲醇按70：30的比例配制無水甲醇和蒸餾水，舉例：取70ml無水甲醇加入到30ml蒸餾水中，配制成100ml的70%甲醇，按需要，可同比例放大或縮小。
（3）35%甲醇按35：65的比例配制無水甲醇和蒸餾水，舉例：取35ml無水甲醇加入到65ml蒸餾水中，配制成100ml的35%甲醇，按需要，可同比例放大或縮小。

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準(zhǔn)備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準(zhǔn)備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風(fēng)險。
 
【操作注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存(包被板開封后請于2～8℃避光保存，使用期限為1個月)。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用。

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