磺胺多殘留快速檢測試劑盒是我司的熱銷產(chǎn)品之一，上海古朵生物科技有限公司是集研制開發(fā)、銷售、fu務(wù)于一體的高新技術(shù)企業(yè),公司產(chǎn)品涉及臨床快速診斷試劑、食品安全檢測劑，du品快速檢測，動物疾病防疫檢測試劑，免疫診斷試劑、臨床血液學(xué)和體液學(xué)檢驗(yàn)試劑、微生物檢驗(yàn)試劑、分子生物學(xué)檢驗(yàn)試劑、臨床生化試劑、有機(jī)試劑等眾多領(lǐng)域。

名稱：磺胺多殘留快速檢測試劑盒
供應(yīng)商：古朵生物
產(chǎn)地：國產(chǎn)|進(jìn)口
檢測樣本:組織、水產(chǎn)、蜂蜜、禽蛋
檢測方法： 酶聯(lián)免疫法
檢測限： 0.1ppb/0.05ppb
產(chǎn)品規(guī)格：96T×1/盒
保質(zhì)期：12個月
儲藏：于2～8℃避光保存。

磺胺多殘留快速檢測試劑盒操作步驟  詳細(xì)介紹：

 1 原理及用途

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織、血清、蜂蜜、牛奶、尿液等樣本中的磺胺類藥物（Sulfonamides，SAs），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的磺胺類藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗磺胺類藥物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含磺胺類藥物含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中磺胺類藥物的殘留量。

2 技術(shù)指標(biāo)

2.1 試劑盒靈敏度：0.5ppb(ng/ml)

2.2 反應(yīng)模式：25℃，45min～15min

2.3 檢測下限：

組織（高檢測限方法）……………0.5ppb

組織（低檢測限方法）……………2.5ppb

血清、尿液…………………………2ppb

蜂蜜…………………………………0.5ppb

牛奶…………………………………10ppb

 

2.4 交叉反應(yīng)率：

 2.5 樣本回收率：

組織、蜂蜜………………………95±25%

尿樣、牛奶、血清………………85±25%

3 試劑盒組成

酶標(biāo)板……………………………96孔

標(biāo)準(zhǔn)液：各1ml

0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb

高標(biāo)準(zhǔn)液（紅蓋）：1ppm…………1ml

酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………5.5ml

抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20X濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

2X復(fù)溶液（黃蓋）…………………50ml

說明書………………………………1份

 

4 需要的器材和試劑

4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：單道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道300μl

4.3 試劑：乙酸乙酯、正己烷、乙*、Na2HPO4·12H2O、NaOH 、濃HCL 、NaH2PO4·2H2O 

5 樣本前處理

5.1 樣本處理前須知：

實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5.2 配液：

配液1：0.2M  NaOH溶液

    0.8gNaOH用去離子水100ml溶解

配液2：0.02M  PB緩沖液

    稱取2.58g Na2HPO4·12H2O和0.44g NaH2PO4·2H2O加去離子水500ml溶解。

配液3：0.5M鹽酸溶液

    4.3ml濃HCL加入去離子水定容至100ml混勻。

配液4：復(fù)溶液

    將2×復(fù)溶液用去離子水2倍稀釋，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在4℃環(huán)境可保存一個月。

5.3 樣本前處理步驟：

5.3.1組織樣本（高檢測限）處理方法

1）稱取3±0.05g均質(zhì)組織樣本置離心管中，加入3ml 0.02M PB緩沖液充分振蕩混勻，再加入4ml乙酸乙酯和2ml乙*，充分振蕩10min，于4000r/min以上速度離心10min；

2）移取2ml上層液體（約相當(dāng)于1g的樣本）在50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?nbsp;

3）加1ml正己烷溶解干燥的殘留物，再加1ml復(fù)溶液，強(qiáng)烈振蕩1min，4000r/min，離心5min； 

4）除去上層正己烷，取下層水相50μl用于分析。 

    樣本稀釋倍數(shù)：1    檢測下限：0.5ppb 

5.3.2 組織樣本（低檢測限）處理方法

1）稱2.0±0.05g 均質(zhì)組織樣本于離心管中；加入8ml 0.02M PB緩沖液，震蕩2min，4000r/min以上離心10min； 

2）取50μl液體用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù): 5    檢測下限：2.5ppb  

5.3.3血清樣本處理方法 

1）將血樣本于室溫放置30min，于4000r/min以上離心10min，分離出血清或過濾血清；

2）取1ml血清，加入3ml 0.02 M PB緩沖液混合，混合30s；

3）取50μl用于分析。  

    樣本稀釋倍數(shù)：4    檢測下限：2ppb  

5.3.4 蜂蜜樣本處理方法

1）稱取1±0.05g蜂蜜樣本于50ml離心管中，加入1ml 0.5M鹽酸置于37℃環(huán)境中30min；

2）加入2.5ml 0.2M 氫氧化鈉 (將PH值調(diào)至5左右)再加入4ml乙酸乙脂振蕩5min，4000r/min以上室溫離心10min；

3）取2ml上層液體于50-60℃下氮?dú)獯蹈?，?.5ml 已稀釋好的復(fù)溶液復(fù)溶，混合30s；

4）取50μl用于分析。  

    樣本稀釋倍數(shù)：1    檢測下限：0.5ppb

5.3.5 尿樣本處理方法

1）用3ml 0.02 M PB緩沖液與1ml經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合，混合30s； 

2）取50μl液體用于分析。  

    樣本稀釋倍數(shù): 4    檢測下限：2ppb 

5.3.6牛奶樣本處理方法

1）將牛奶樣本用0.02 M PB緩沖液20倍稀釋（如20μl牛奶+380μl 0.02  M PB緩沖液），混合30s；

2）取50μl用于分析。 樣本稀釋倍數(shù)：20    檢測下限：10ppb     

6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

實(shí)驗(yàn)開始前，用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。

6.1 編    號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50μl/孔，再加入50μl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)45分鐘。

6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250μl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

6.4 顯    色：每孔加入底物液A 50μl，再加底物液B 50μl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘。

6.5 終    止：每孔加入終止液50μl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

6.6 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

7 結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計算

標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第1個標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以，即

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。

  8 注意事項(xiàng)

8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

8.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。

8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。

8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。

8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質(zhì)。

8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。

 
【操作注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存(包被板開封后請于2～8℃避光保存，使用期限為1個月)。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用。

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