雞新城疫抗體檢測試劑盒
簡單介紹
雞新城疫抗體檢測試劑盒的詳細介紹
名稱:雞新城疫抗體檢測試劑盒
供應商:古朵生物
產品名稱: 雞新城疫抗體檢測試劑盒,代測
檢測方法: ELISA檢測法
規(guī) 格: 96T/盒
重要參數: NDV Ab
反應時間: 30min-30min-10min
檢測樣本: 雞血清
保質期:12個月
雞新城疫抗體檢測試劑盒 【試驗原理】
臨床上,傳染性支氣管炎是一種急性、高度傳染的病毒性疾病,任何日齡的雞都可以感染。IBV的潛伏期為24-72小時。疾病侵害雞的呼吸系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)。青年雞表現(xiàn)為急性呼吸道癥狀及氣管損傷。死亡率可高達。血清中的病毒抗體可通過酶聯(lián)免疫的方法檢測。血清中的IBV抗體水平及整個雞群的免疫狀況可用ELISA方法進行監(jiān)測。
將滅活的抗原包被在微孔板上,加入稀釋后的血清并孵育,血清中的抗IBV抗體將與包被在微孔板上的IBV結合,形成IBV抗原-抗體復合物。然后洗掉未結合的物質,加堿性磷酸酶標記的抗雞IgG的酶標結合物至微孔板中,酶標物將與IBV抗原-抗體復合物結合。孵育后洗掉未結合的結合物,然后加入底物溶液。底物與堿性磷酸酶反應并生成一種黃色的產物,zui后終止反應,將顏色固定。顏色的深淺可用酶標儀(405-410nm)測定。
【一個微孔板所需的試劑的量】
樣品平均吸光度值 - 陰性對照吸平均吸光度值
=樣品與陽性對照比值(Sp)
陽性對照平均吸光度值 - 陰性對照平均吸光度值
Sp ×(100)= ELISA Unit (EU) 陽性對照值設為100 EU
【結果判定及EU單位說明】
IBV ELISA 值 說明
小于10EUs IBV抗體為陰性
10-15 EUs IBV抗體為弱陽性,應被認為經過免疫或暴露于IBV,油乳狀疫苗也可能引起非特異性低水平抗體。
15-75 EUs IBV抗體適度陽性
>75 EUs IBV抗體強陽性
【操作步驟】
1. 將試劑回溫至室溫,通過顛倒和渦旋將試劑混勻。
2. 將1份4×樣品稀釋液加入到含3份去離子水的容器中,充分混勻,例如,30ml 4×樣品稀釋液加入到90ml去離子水中。
3. 將1份20×洗滌液加入到含19份去離子水的容器中,充分混勻,例如,25ml 20×洗滌液加入到475ml去離子水中。
4. 稀釋前將陽性對照、陰性對照和樣品震蕩均勻。
5. 陽性對照、陰性對照和樣品均需要用樣品稀釋液稀釋后使用。稀釋比例為2μl :800μl。將移液器調到100μl,反復吹打4次使之充分混勻。
6. 將稀釋后的陰性對照、陽性對照分別加入微孔中,每種做兩個平行,每孔100μl;將稀釋后的樣品100μl分別加入孔中,室溫下靜置30分鐘。
7. 棄去微孔板中溶液,每孔加入300μl洗滌液洗滌,重復洗滌2次,在洗滌過程中防止酶標板變干。
8. 每孔立即加入100μl結合物,室溫靜置30分鐘。
9. 重復步驟7進行洗板。
10. 每孔立即加入100μl底物,室溫靜置30分鐘。
11. 不要倒掉板內液體,每孔立即加入100μl終止液。
12. 用酶標儀雙波讀數(405nm或410nm作為主要波長,630nm或650nm為參考波長),計算結果。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋,未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存(包被板開封后請于2~8℃避光保存,使用期限為1個月)。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
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