豬藍耳病毒 IgG抗體檢測試劑盒
簡單介紹
豬藍耳病毒 IgG抗體檢測試劑盒的詳細介紹
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (ELISA)
供應(yīng)商:古朵生物
產(chǎn)地:國產(chǎn)|進口
產(chǎn)品規(guī)格:96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
保質(zhì)期:12個月
儲藏:4~30℃密封干燥保存,忌冷凍,避免陽光直射。
豬藍耳病毒 IgG抗體檢測試劑盒 資料說明 試劑盒原理:
本試劑盒系由預(yù)包被豬藍耳病毒(PRRSV)GP5+GP6重組蛋白的微孔板和酶標(biāo)記二抗及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清或血漿中豬藍耳病毒特異性抗體。實驗時,在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,經(jīng)溫育后,若樣品中含有豬藍耳病毒的特異性抗體,則將與包被板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;再加入酶標(biāo)二抗,與包被板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有特異性抗體。
【樣品制備】 取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血、無污染。樣品短期可于2~8℃保存,長期需置-20℃保存。
【樣品稀釋】 用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,混勻)。陰、陽性對照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫(25℃左右),并搖動使沉淀的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
豬藍耳病毒 IgG抗體檢測試劑盒 【試驗操作方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量包被微孔板條,設(shè)空白、陰性及陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,2~8℃保存。
3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照血清100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl;空白對照孔不加。
4.混勻,置37℃反應(yīng)30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl(空白孔除外)。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,同步驟5。
8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl,混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,混勻,用空白孔調(diào)零,于450nm(630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A450)。
【結(jié)果判定】定義:N=陰性對照孔平均A值;P=陽性對照孔平均A值;S=樣品孔A值;S/P=樣品孔A值/陽性對照孔平均A值。
1.正常情況下,N≤0.10,P≥0.50。
2.S/P≥0.18時判為陽性,S/P<0.15時判為陰性,0.15≤S/P<0.18時判為可疑。
當(dāng)本實驗結(jié)果為陰性時表明豬只抗體水平不足,建議補打相應(yīng)疫苗。
【試驗方法的局限性】該試驗僅作為定性檢測豬藍耳病毒IgG抗體,不能區(qū)別疫苗免疫和野毒感染。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,各種實驗廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存(包被板開封后請于2~8℃避光保存,使用期限為1個月)。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶,使用時需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
8.不同批號試劑組分不得混用。
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