48t/96t 人乙型肝炎病毒前S2抗原ELISA試劑盒操作步驟
產(chǎn)品名稱:48t/96t 人乙型肝炎病毒前S2抗原ELISA試劑盒操作步驟
產(chǎn)品型號(hào):48t/96t
產(chǎn)品廠商:上海古朵生物科技有限公司
簡(jiǎn)單介紹
48t/96t 人乙型肝炎病毒前S2抗原ELISA試劑盒操作步驟的詳細(xì)介紹
中文名:人乙型肝炎病毒前S2抗原(HBV preS2Ag)ELISA試劑盒
英文名:human hepatitis B virus,HBV preS2Ag ELISA Kit
供應(yīng)商:上海古朵
規(guī)格:48t/96t
保存:2~8℃
有效期:6個(gè)月
特異性:本ELISA檢測(cè)試劑盒可同時(shí)檢測(cè)天然或重組的,且與其他相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)。
檢測(cè)種屬:人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測(cè)試劑盒等種屬。
適用范圍:此試劑盒僅用于科研實(shí)驗(yàn),禁用于臨床
人乙型肝炎病毒前S2抗原ELISA試劑盒操作步驟 檢測(cè)原理:
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到預(yù)先包被人乙型肝炎病毒前S2抗體(HBV preS2Ab)單克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標(biāo)工作液,溫育足夠時(shí)間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過(guò)氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物,在酸的作用下變成黃色,顏色的深淺與樣品中人乙型肝炎病毒前S2抗體(HBV preS2Ab)濃度呈正相關(guān),450nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值,計(jì)算樣本中人乙型肝炎病毒前S2抗體(HBV preS2Ab)含量。
注意事項(xiàng):
⑴ 嚴(yán)格按照人脂蛋白脂酶(LPL)elisa試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30~60min。
⑵ 加樣后及時(shí)放人孵箱。標(biāo)本較多時(shí),要分批操作。按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,防止孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗徹底。
(3)封板溫育時(shí),各孔一定要封嚴(yán),防止陽(yáng)性標(biāo)本的液體蒸發(fā),產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
(4)用洗板機(jī)洗板時(shí),保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干:還要防止針口有纖維蛋白或異物,這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。
(5)合理安排檢測(cè)量,以免反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。
(6)加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。
(7)顯色劑盡量在臨用前配制,堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用。
(8)加樣時(shí)保持顯色劑不外流;A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
(9)應(yīng)保證C清潔,整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至zui低限度。從而提高檢測(cè)的特異性。并得到更準(zhǔn)確、可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
人乙型肝炎病毒前S2抗原ELISA試劑盒操作步驟 操作步驟:
1、準(zhǔn)備:從冰箱取出試劑盒,室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本:取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板,固定于框架上,分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔和空白對(duì)照孔,記錄各孔位置,在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL;待測(cè)樣本孔中先加入待測(cè)樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對(duì)照孔不加。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板)。
6、加酶標(biāo)工作液:每孔加入酶標(biāo)工作液50μL,空白對(duì)照孔不加。
7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說(shuō)明書操作洗板)。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。
10、終止:取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值(OD值)。
12、計(jì)算:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值,計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
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