ELISA實驗結(jié)果不顯色是什么原因?qū)е?/h1>
發(fā)布時間：2023-11-23 閱讀：204次
ELISA實驗結(jié)果不顯色是什么原因?qū)е?
有很多一些新手ELISA試驗人員來說，試驗做得不理想是難免的事。這不，就在近期一個朋友找古朵生物小編咨詢。這位朋友說道：“初度用間接法做ELISA試驗，做了幾回結(jié)果都沒有顯色，原因在哪里呢”
可能原因一：
1.包被原：包括你的包被液有無問題，有沒有配錯。包被原一般加100微升，37度2小時;
2.關(guān)閉：關(guān)閉液用的是否合適?你說做了幾回都沒顯色，空白孔也不顯嗎?假如空白也無色彩，那關(guān)閉就沒有問題。一般關(guān)閉是200微升每孔，也能夠滿孔關(guān)閉
3.一抗：查看你的一抗是否失效。是否是在37度反響
4.二抗：底物，底物緩沖液……這些都要好好查看!
5.洗刷：用PBST洗刷，包被和關(guān)閉時洗板3次;一抗二抗洗刷5次，每次間隔3分鐘。手工和機器洗刷沒什么不同，就是省力一些。洗5次不會有負影響，在一抗和二抗洗刷過程中，恰恰需求多洗幾回，這樣有助于削減非特異性吸附
可能原因二：
1、陽性對照不顯色
漏加陽性對照
陽性對照孔忘加酶或忘加顯色劑
陽性對照受污染
2、陽性對照顯色淺(HBeAb HBcAb陰性對照顯色淺)
試劑和保存不當、活性下降
在使用前試劑盒未放置在室溫平衡
溫育時間不夠或孵育溫度過低
洗板浸泡時間過長、洗板次數(shù)過多
使用不正確的洗液
洗液中含有防腐劑同時殘留量過多
洗板后酶標板被干透
讀數(shù)時使用波長不正確
濾光片不清潔或濾光片位置錯誤
讀數(shù)時酶標板放置位置錯誤
陽性對照活性下降
酶標失活
3、陰性對照顯色(HBeAb、HBcAB除外)
實驗過程受污染
陰性對照污染
酶滴在孔壁上
4、整板不顯色
試劑和保存不當、已經(jīng)失活
忘記加酶、可檢查滴瓶內(nèi)酶量
忘記加抗原或中和試劑
忘記加顯色劑A或顯色劑B
5、陽性對照讀數(shù)不正常
加入標本后未進行必要的混勻
標本稀釋錯誤
加樣量不正確
冷凍標本未完全溶解混勻
標本中含有防腐劑
6、血清本底高
試劑盒靈敏度高
加樣時使用同一槍頭、交叉污染
孵育時間過長或溫度過高
洗板次數(shù)不足，浸泡時間短
洗板時洗液量少或殘留量多
洗板時洗液量過多、串孔
洗板機管道中有霉菌生長
洗液瓶混用
洗板機洗板頭阻塞或洗板機洗板頭位置錯誤
配置洗液的去離子水或蒸餾水被污染
終止液濃度不夠，沒有充分混勻，或終止液被污染
讀數(shù)時酶標板底部有水蒸氣凝結(jié)
酶標儀偏差
7、假陽性結(jié)果
實驗器具被污染
血清中出現(xiàn)纖維蛋白凝集
血清標本中出現(xiàn)過多的紅細胞
血漿標本處理不當
標本中含有灰塵、顆粒或細菌等
標本被反復(fù)凍融
加標本后進行不正確的振蕩
沿孔壁上加入標本，加樣后出現(xiàn)過多的氣泡
酶標滴加在孔壁上，洗板未洗凈
混用洗液或洗液稀釋錯誤
洗液瓶中、管道或配置洗液的水中有霉菌
洗板次數(shù)不足或浸泡時間短
洗板時洗液量少或殘留量多
洗板時洗液量過多、串孔
讀數(shù)時酶標板底部有水蒸氣凝結(jié)
洗液瓶、廢液瓶混用
讀數(shù)過程中板孔中有氣泡
酶標儀偏差
8、同一板內(nèi)重復(fù)性差
標本混勻不充分
試劑混勻不充分
標本與酶結(jié)合物混勻不充分
加樣技術(shù)差異
加樣器故障或加樣器被污染
加樣時間過長導(dǎo)致孵育時間不同
孵育器內(nèi)部的溫度不一致，造成酶標板孔間的孵育溫度差異
讀數(shù)時酶標板孔間有氣泡
9、HCV血清本底高
靈敏度高
樣本稀釋液加液量不足100ul
槍頭深入血清過深，致使外壁沾有血清導(dǎo)致加樣偏多(>10ul)
同一孔加了兩次樣本
其他可能原因參考HBsAg
10、HIV陽性對照低
誤將陽性對照稀釋
陽性對照未混勻
加液量不足
其他可能原因參考HBsAg
11、HIV血清本底高
標準變，靈敏度提高
標本稀釋液加液量不足100ul
槍頭深入血清過深，致使外壁沾有血清導(dǎo)致加樣偏多(>10ul)
同一孔加了兩次樣本
其他可能原因參考HBsAg
上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒
ELISA實驗結(jié)果不顯色是什么原因?qū)е?
有很多一些新手ELISA試驗人員來說，試驗做得不理想是難免的事。這不，就在近期一個朋友找古朵生物小編咨詢。這位朋友說道：“初度用間接法做ELISA試驗，做了幾回結(jié)果都沒有顯色，原因在哪里呢”
可能原因一：
1.包被原：包括你的包被液有無問題，有沒有配錯。包被原一般加100微升，37度2小時;
2.關(guān)閉：關(guān)閉液用的是否合適?你說做了幾回都沒顯色，空白孔也不顯嗎?假如空白也無色彩，那關(guān)閉就沒有問題。一般關(guān)閉是200微升每孔，也能夠滿孔關(guān)閉
3.一抗：查看你的一抗是否失效。是否是在37度反響
4.二抗：底物，底物緩沖液……這些都要好好查看!
5.洗刷：用PBST洗刷，包被和關(guān)閉時洗板3次;一抗二抗洗刷5次，每次間隔3分鐘。手工和機器洗刷沒什么不同，就是省力一些。洗5次不會有負影響，在一抗和二抗洗刷過程中，恰恰需求多洗幾回，這樣有助于削減非特異性吸附
可能原因二：
1、陽性對照不顯色
漏加陽性對照
陽性對照孔忘加酶或忘加顯色劑
陽性對照受污染
2、陽性對照顯色淺(HBeAb HBcAb陰性對照顯色淺)
試劑和保存不當、活性下降
在使用前試劑盒未放置在室溫平衡
溫育時間不夠或孵育溫度過低
洗板浸泡時間過長、洗板次數(shù)過多
使用不正確的洗液
洗液中含有防腐劑同時殘留量過多
洗板后酶標板被干透
讀數(shù)時使用波長不正確
濾光片不清潔或濾光片位置錯誤
讀數(shù)時酶標板放置位置錯誤
陽性對照活性下降
酶標失活
3、陰性對照顯色(HBeAb、HBcAB除外)
實驗過程受污染
陰性對照污染
酶滴在孔壁上
4、整板不顯色
試劑和保存不當、已經(jīng)失活
忘記加酶、可檢查滴瓶內(nèi)酶量
忘記加抗原或中和試劑
忘記加顯色劑A或顯色劑B
5、陽性對照讀數(shù)不正常
加入標本后未進行必要的混勻
標本稀釋錯誤
加樣量不正確
冷凍標本未完全溶解混勻
標本中含有防腐劑
6、血清本底高
試劑盒靈敏度高
加樣時使用同一槍頭、交叉污染
孵育時間過長或溫度過高
洗板次數(shù)不足，浸泡時間短
洗板時洗液量少或殘留量多
洗板時洗液量過多、串孔
洗板機管道中有霉菌生長
洗液瓶混用
洗板機洗板頭阻塞或洗板機洗板頭位置錯誤
配置洗液的去離子水或蒸餾水被污染
終止液濃度不夠，沒有充分混勻，或終止液被污染
讀數(shù)時酶標板底部有水蒸氣凝結(jié)
酶標儀偏差
7、假陽性結(jié)果
實驗器具被污染
血清中出現(xiàn)纖維蛋白凝集
血清標本中出現(xiàn)過多的紅細胞
血漿標本處理不當
標本中含有灰塵、顆粒或細菌等
標本被反復(fù)凍融
加標本后進行不正確的振蕩
沿孔壁上加入標本，加樣后出現(xiàn)過多的氣泡
酶標滴加在孔壁上，洗板未洗凈
混用洗液或洗液稀釋錯誤
洗液瓶中、管道或配置洗液的水中有霉菌
洗板次數(shù)不足或浸泡時間短
洗板時洗液量少或殘留量多
洗板時洗液量過多、串孔
讀數(shù)時酶標板底部有水蒸氣凝結(jié)
洗液瓶、廢液瓶混用
讀數(shù)過程中板孔中有氣泡
酶標儀偏差
8、同一板內(nèi)重復(fù)性差
標本混勻不充分
試劑混勻不充分
標本與酶結(jié)合物混勻不充分
加樣技術(shù)差異
加樣器故障或加樣器被污染
加樣時間過長導(dǎo)致孵育時間不同
孵育器內(nèi)部的溫度不一致，造成酶標板孔間的孵育溫度差異
讀數(shù)時酶標板孔間有氣泡
9、HCV血清本底高
靈敏度高
樣本稀釋液加液量不足100ul
槍頭深入血清過深，致使外壁沾有血清導(dǎo)致加樣偏多(>10ul)
同一孔加了兩次樣本
其他可能原因參考HBsAg
10、HIV陽性對照低
誤將陽性對照稀釋
陽性對照未混勻
加液量不足
其他可能原因參考HBsAg
11、HIV血清本底高
標準變，靈敏度提高
標本稀釋液加液量不足100ul
槍頭深入血清過深，致使外壁沾有血清導(dǎo)致加樣偏多(>10ul)
同一孔加了兩次樣本
其他可能原因參考HBsAg
上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區(qū)。是一家專門從事生物技術(shù)相關(guān)產(chǎn)品，勵志研發(fā)和銷售的綜合性生物公司，產(chǎn)品遠銷多個國家和地區(qū)，我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求"的經(jīng)營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導(dǎo)向，不斷開發(fā)高質(zhì)量的新產(chǎn)品，提供客戶滿意的綜合服務(wù)質(zhì)量"的方針。古朵試劑盒
