古朵闡述:ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中常見問題剖析
古朵闡述:ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中常見問題剖析
1.標(biāo)曲不顯色或顯色很弱,樣本顯色:
溶解標(biāo)準(zhǔn)品以及倍比稀釋時(shí),未渦旋轟動(dòng)或不可充沛。標(biāo)準(zhǔn)品溶解、倍比稀釋時(shí)均需求渦旋轟動(dòng)以保證充沛混勻。單純依托移液器重復(fù)吹打,效率較低、效果也不必定jia。
2.樣本經(jīng)不同梯度稀釋,ELISA試劑盒核算得到的樣本值差異較大:
有時(shí)分咱們不清楚樣本中目的蛋白的濃度怎樣,應(yīng)該怎樣稀釋,那么咱們就會(huì)做下預(yù)實(shí)驗(yàn),確認(rèn)稀釋倍數(shù)。但是有時(shí)分同一樣本做了幾個(gè)不同梯度稀釋后,核算得到的樣本值之間差異較大。
3.本底偏高:
樣本值測不到標(biāo)曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(關(guān)于高敏ELISA可以恰當(dāng)放寬要求)。尤其是樣本值特別低的時(shí)分,本底過高會(huì)掩蓋目的信號,導(dǎo)致無法測到樣本值。在參加TMB顯色后,需實(shí)時(shí)觀察標(biāo)曲顯se情況。通常在S5孔有肉眼可見的弱小藍(lán)色,即可中止反應(yīng)。
4.標(biāo)曲顯色,樣本不顯色:
當(dāng)樣本中目的蛋白濃度極低或者樣本中攪擾要素較強(qiáng),就無法檢測到?,F(xiàn)在ELISA試劑盒仍然是蛋白檢測活絡(luò)度gao的方法,與不同技能結(jié)合后,衍生出了多種類型的ELISA,提高了檢測活絡(luò)度。
5.不同試劑盒中的組分能否通用:
除非是共用的試劑如洗液、檢測緩沖液,其它組分不主張用其它試劑盒的組分,乃至是同一目標(biāo)不同批次的試劑盒里的組分。這些組分(包含標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、檢測抗體、酶等)都是經(jīng)過優(yōu)化的,假如輕率運(yùn)用其它試劑盒的組分,有或許對效果產(chǎn)生影響。
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